专题二微生物的培养 无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开。 无菌技术消毒与灭菌的区别？ 无菌技术分类定义方法灭菌法杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微波、等离子体化学法：醛类、烷化剂高效消毒法杀灭一切致病微生物紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等中效消毒法杀灭除芽孢外的致病微生物超声波、碘类、醇类、酚类低效消毒法杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子 无菌技术消毒的方法：1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒4、氯气消毒水源5、紫外线消毒…… 无菌技术灭菌的方法：1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min. 无菌技术最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存 1、培养基的配制人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。固体培养基液体培养基天然培养基合成培养基基础培养基加富培养基鉴别培养基选择培养基 1、培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌） 1、培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1．称量2．溶化3．调pH：pH7．64．过滤：这一步可以省去。5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6．加塞7．包扎8．灭菌9．倒平板10．无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 2、倒平板技术 2、倒平板技术 3、微生物的接种技术 3、微生物的接种技术 3、微生物的接种技术 4、微生物的恒温培养 4、微生物的恒温培养 4、微生物的恒温培养 5、菌种的保存1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法 实践:分离土壤中的细菌1、由土壤浸出液中提取细菌。2、有哪些注意事项？3、如何判断土壤中有哪些种类的细菌？菌落的特征？ 实践:分离土壤中的细菌关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 实践:分离土壤中的细菌关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 实践:分离土壤中的细菌关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 实践:分离土壤中的细菌关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 实践:分离土壤中的细菌关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 实践1:分离土壤中的细菌关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 实践2:分离土壤中的分解尿素的细菌1、培养基的选择？ 实践2:分离土壤中的分解尿素的细菌1、培养基的选择？构建怎样的选择培养基呢？附：鉴别培养基：伊红—美蓝培养基是鉴别培养基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为大肠杆菌的代谢产物与伊红—美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。 实践3:分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目1、如何对细菌进行计数？ 实践3:分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目1、如何对细菌进行计数？ 实践3:分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目1、如何对细菌进行计数？ 实践3:分离并计算土壤中的分解尿素的细菌的数目1、如何对细菌进行计数？