选修1专题二课题1微生物的实验室培养 课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养条件：（1）合适的营养和环境条件（2）确保其他微生物无法混入一.培养基1.概念：按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2.种类：（按物理形态分）液体培养基、半固体培养基固体培养基应用微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面按照培养基用途分选择性培养基鉴别培养基按照培养基的成分来分合成培养基、天然培养基、半合成培养基 3.成分：思考：各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？水、无机盐、碳源、氮源、（生长因子）+满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求C 二.无菌技术思考：1.什么是无菌技术？包括哪些方面？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 C 3.常用的消毒方法：煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法常用的灭菌方法：灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌：100kPa121℃15-30min判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。（1）豆浆（2）游泳池（3）超净工作台（4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶（5）培养细菌用的培养皿（6）无菌水（7）牛肉膏蛋白胨培养基（8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手牛奶接种室、接种箱或超净工作台接种工具，接种环、接种针或其他金属用具玻璃器皿（吸管、培养皿） 三.实验操作---大肠杆菌的纯化培养（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算－称量－溶化－灭菌－倒平板（二）纯化大肠杆菌最常用的接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法（冷却至50℃） 问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 菌种的保存1、临时保藏法：对象：温度：缺点：2、甘油管藏法：对象：温度：结果分析与评价课题延伸（P20）频繁使用的菌种4℃（冰箱）容易被污染或产生变异长期保存的菌种-20℃（冷冻箱） 接种环接种针 倒平板讨论1，2讨论3，4 平板划线法讨论2，3 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环：每次划线前灼烧接种环：划线结束后灼烧接种环：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 涂布器 1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。不要空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 选择培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入四环素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌